服务和产品

AI驱动质谱技术 聚焦精准医疗

单抗 / 蛋白从头测序

百蓁生物作为蛋白从头测序技术的发明者,我们拥有经验丰富的技术团队和先进的Orbitrap Eclipse、timsTOF pro2等质谱仪,近年来已完成近千个抗体和重组蛋白的测序和鉴定服务。
服务优势:
:抗体/蛋白序列100%准确
:抗体/蛋白从头测序和糖基化的分析步到位,解析生物药更全面的信息;
:强大的糖肽解析能力,如发现CDR区域的关键糖基化修饰等;
:深入发现每一个糖基化位点,提供基于位点的糖型结构及比例。

服务介绍

多肽 (10-50AA)、重组蛋白、纳米抗体 (15kDa)、单克隆抗体 (150kDa)、多克隆抗体等蛋白分子的一级结构是发挥其生物学功能的核心,因此,对蛋白质完整序列准确快速的分析有助于未知蛋白质的功能研究。相比传统的数据库搜索法和 Edman 降解,基于质谱的从头测序可以不借助任何蛋白质或者 DNA 数据库信息,直接对蛋白质的序列进行分析。

百蓁生物拥有BSI 授权的质谱抗体测序技术、自主知识产权的 PEAKS 系列分析软件和经验丰富的专业技术服务团队。目前,我们的标准程序结合了自上而下和自下而上的质谱技术,确保了每一个氨基酸的正确性和全抗体的序列精度,包括 N 末端及 C 末端的修饰和 N- 连接的聚糖,可弥补传统蛋白质鉴定方法在未知蛋白质序列和突变分析上的不足。


服务类型

服务内容

经典测序

最快 2 个工作日内可交付抗体全长氨基酸序列,正式报告包含报告实验过程、蛋白序列、二级图谱支撑、I/L 区分列表等信息。

活性保证测序

依据测序获得的抗体序列,进行构建表达纯化,交付 3 mg 重组抗体;客户验证抗体活性成功后,交付抗体全长测序报告;项目周期 6 周。


技术流程

服务优势

1.高可信度图谱支撑:每个位点的氨基酸有超过十种不同的肽段支持,每个氨基酸在质谱里有强的离子片段峰证据。

2.完整抗体质量核对:进行重链和轻链的完整质量测定,以确认组装的抗体序列,包括N末端焦谷氨酸环化修饰,重链C末端赖氨酸丢失和N-连接的寡糖。

3.亮氨酸(L)和异亮氨酸(I)区分:1)EThcD中的w-ion检测、2)酶裂解选择性、3)同源性统计数据,以明确区分Leu / Ile残基。

图 | 利用 EThcD 谱中的诊断离子区别亮氨酸(L)和异亮氨酸(I) 

 图 | 利用胰凝乳蛋白酶或胃蛋白酶对亮氨酸(L)的优选选择性 

 图 | I/L 区分的三重验证

4.无需理论参比序列,并且可以直接对含有2个主要成分的多克隆抗体进行直接的从头测序分析。


应用领域

1.多肽药物、重组蛋白、单抗、双抗、多抗(n=2)、纳米抗体、Fab/Fc、交联抗体等未知蛋白的从头测序;
2.抗体药物研发以及生产过程的质控。

样品要求及交付标准

送样要求

蛋白样品≥100 ug;纯度≥90%

项目周期

最快2个工作日

交付标准

出具正式报告,报告实验过程、蛋白序列、二级图谱支撑、I/L区分列表。



案例分享

案例分析:左图是抗体样品从头测序实例,在没有参考序列情况下,经过 PEAKS AB 软件,使用 de novo 算法自动化组装后的序列,每一个氨基酸都有很多 de novo 肽段支持(红色部分),右侧是样品参考序列。可以发现左边组装序列重链 68-70 位氨基酸分别是TLS,而参考序列此处的氨基酸是 SIT,TLS 与 SIT 的分子量相同,但是 SIT 氨基酸是没有 de novo 肽段支持的。由此可见 de novo 算法是不仅仅区分分子量的,还可以根据多肽二级质谱图的碎片信息精确区分到每一个氨基酸。

抗体标准品重链序列